Spider-Man v noci bojuje ako superhrdina proti najväčším zločincom New Yorku, zlieza steny mrakodrapov a vrhá na zloduchov siete, aby sa ráno premenil na plachého študenta Petera Parkera, ktorého trápia bežné ľudské problémy. Keď na výstave vedeckých noviniek zmutovaný rádioaktívny pavúk uhryzne stredoškoláka Petera Parkera, navždy mu zmení život vďaka jeho jedu získa nadľudské schopnosti.